探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。
实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。
材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干。无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。
方法步骤：
（1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在_______操作。
（2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL，转至9mL无菌水的大试管中，依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作，试管口和移液管应在离火焰____cm处。
（3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布__\__个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布____个平板。
（4)培养。放入恒温箱内，在适宜温度条件下培养3d～4d。一般每隔__\__小时统计一次，选取____时的记录作为结果，这样可以防止____。
（5)细菌的计数。当菌落数目稳定时，选取菌落数在____\_的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是_______。（稀释度是105)
（6)预期结果。相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数__\_（填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是_________。
相关标签： 培养基 固氮菌 蛋白胨
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